اﺻﻮل روش:
ﺑﺨﺶ ﻋﻤﺪه ﻟﮑﻮﺳﯿﺖ ﻫﺎى ﺧﻮن و ﻣﺎﯾﻊ ﻣﻨﻰ، ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ دﻓﺎﻋﻰ ﺧﻮد را ﺑﻪ واﺳﻄﻪ ﻓﺎﮔﻮﺳﯿﺘﻮز ﻋﻮاﻣﻞ ﺑﯿﮕﺎﻧﻪ اﻧﺠﺎم ﻣﻰ دﻫﻨﺪ. اﯾﻦ ﻟﻮﮐﻮﺳﯿﺖ ﻫﺎ داراى آﻧﺰﯾﻢ ﭘﺮاﮐﺴﯿﺪاز ﺑﻮده و ﺑﻮاﺳﻄﻪ ﺗﻮﻟﯿﺪ رادﯾﮑﺎل ﻫﺎى آزاد ﻋﻤﻞ ﺧﻮد را اﻧﺠﺎم ﻣﻰ دﻫﻨﺪ ﻟﺬا ﺑﺎ رﻧﮓ آﻣﯿﺰى ﮔﺮاﻧﻮﺳﯿﺖ ﻫﺎی ﻟﻮﮐﻮﺳﯿﺖ ﻫﺎی ﭘﻠﯽ ﻣﻮرﻓﻮﻧﻮﮐﻠﺌﺎر ﺑﺎ ﺗﮑﻨﯿﮏ رﻧﮓ آﻣﯿﺰی ﭘﺮاﮐﺴﯿﺪاز ﻣﯽ ﺗﻮان ﻟﻮﮐﻮﺳﯿﺖ ﻫﺎى ﻣﺎﯾﻊ ﻣﻨﯽ را ﺷﻤﺎرش ﻧﻤﻮد. اﯾﻦ رﻧﮓ آﻣﯿﺰی ﯾﮏ روش ﺳﯿﺘﻮ ﺷﯿﻤﯿﺎﯾﯽ، ﺳﺎده و دﻗﯿﻖ ﺑﺮای ﺑﺮرﺳﯽ ﺗﻌﺪاد ﻟﻮﮐﻮﺳﯿﺖ ﻫﺎ در ﻣﺎﯾﻊ ﻣﻨﻰ ﻣﯽ ﺑﺎﺷﺪ.
ﻣﻮاد و ﻣﺤﻠﻮل ﻫﺎی ﻣﻮﺟﻮد در ﮐﯿﺖ:
محلول A( 24 میلی لیتر)
محلول B( 500 میکرو لیتر)
ﻣﻮاد و ﺗﺠﻬﯿﺰات ﻣﻮرد ﻧﯿﺎز ﮐﻪ درﮐﯿﺖ وﺟﻮد ﻧﺪارﻧﺪ:
ﻣﯿﮑﺮوﺳﮑﻮپ ﻧﻮری
ﻻم ﻫﻤﻮﺳﺎﯾﺘﻮﻣﺘﺮ (ﻧﺌﻮﺑﺎر)
نموﻧﻪ ﻣﻮرد ﻧﯿﺎز
ﻧﻤﻮﻧﻪ ﻣﺎﯾﻊ ﻣﻨﻰ : ﻧﻤﻮﻧﻪ ﻣﻨﯽ ﺗﺎزه ﺑﺎﯾﺪ در ﻇﺮف اﺳﺘﺮﯾﻞ ﺟﻤﻊ آوری ﮔﺮدد و ﺑﻼﻓﺎﺻﻠﻪ ﺑﻌﺪ از درﯾﺎﻓﺖﻣﻮرد ارزﯾﺎﺑﻰ ﻗﺮار ﮔﯿﺮد.
دﺳﺘﻮراﻟﻌﻤﻞ اﺳﺘﻔﺎده از ﮐﯿﺖ:
- اﺑﺘﺪا 2 ﻣﯿﻠﻰ ﻟﯿﺘﺮ از ﻣﺤﻠﻮل A را ﺑﺎ 2/5 ﻣﯿﮑﺮو ﻟﯿﺘﺮ از ﻣﺤﻠﻮل B در ﯾﮏ ﻣﯿﮑﺮوﺗﯿﻮپ ﺑﺎ ﺣﺠﻢ 2 ﻣﯿﻠﻰ ﻟﯿﺘﺮ ﻣﺨﻠﻮط ﮐﻨﯿﺪ اﯾﻦ ﻣﺤﻠﻮل ﺑﻪ ﺻﻮرت روزاﻧﻪ و ﺗﺎزه ﺗﻬﯿﻪ ﻣﯽ ﺷﻮد و ﺑﺮاى ﺑﺮرﺳﻰ 18 ﻧﻤﻮﻧﻪ ﮐﻔﺎﯾﺖ ﻣﻰ ﮐﻨﺪ. اﯾﻦ ﻣﺤﻠﻮل ﺑﺎﯾﺪ در دﻣﺎى آزﻣﺎﯾﺸﮕﺎه و در ﻣﺤﯿﻂ ﺗﺎرﯾﮏ ﻧﮕﻬﺪارى ﺷﻮد.
- ﺑﺮای اﻧﺠﺎم ﻫﺮ ﺗﺴﺖ ﻣﻘﺪار 100 ﻣﯿﮑﺮو ﻟﯿﺘﺮ از ﻣﺤﻠﻮل ﮐﺎر روزاﻧﻪ را ﺑﺎ 100 ﻣﯿﮑﺮو ﻟﯿﺘﺮ از ﻣﺎﯾﻊ ﻣﻨﻰ در ﯾﮏ ﻣﯿﮑﺮوﺗﯿﻮپ ﺑﺎ ﺣﺠﻢ 2/0 ﻣﯿﻠﻰ ﻟﯿﺘﺮ ﻣﺨﻠﻮط ﮐﺮده و ﺑﺮاىﻣﺪت 3 ﺗﺎ 4 دﻗﯿﻘﻪ در دﻣﺎی ﻣﺤﯿﻂ اﻧﮑﻮﺑﻪ ﺷﻮد.
- ﭘﺲ از ﮔﺬﺷﺖ اﯾﻦ زﻣﺎن ﻣﺤﻠﻮل را ﺧﻮب ﻣﺨﻠﻮط ﮐﺮده و 10 ﻣﯿﮑﺮو ﻟﯿﺘﺮ از آن را روى ﻻم ﻫﻤﻮﺳﺎﯾﺘﻮﻣﺘﺮ ﺗﻤﯿﺰ ﻗﺮار داده و ﭘﺲ از ﭘﻮﺷﺎﻧﺪن آن ﺑﺎ ﻻﻣﻞ ﻣﻨﺎﺳﺐ ﺷﻤﺎرش ﺳﻠﻮل ﻫﺎ اﻧﺠﺎم ﻣﻰ ﺷﻮد.
ﻧﺤﻮه ﺷﻤﺎرش:
ﺗﻌﺪاد ﻟﮑﻮﺳﯿﺖ ﻫﺎ در ﯾﮏ ﻣﯿﻠﻰ ﻟﯿﺘﺮ از ﻣﺎﯾﻊ ﻣﻨﻰ= ﻣﺠﻤﻮع ﻟﻮﮐﻮﺳﯿﺖ ﻫﺎی 4 ﺧﺎﻧﻪ 16 ﺗﺎﯾﯽ در ﻻم ﻧﺌﻮﺑﺎر در ﻋﺪد 10000 ﺿﺮب و ﺳﭙﺲ ﺑﺮ ﻋﺪد 2 ﺗﻘﺴﯿﻢ ﻣﻰ ﮔﺮدد
ﻗﺒﻞ از اﺳﺘﻔﺎده از ﻣﺤﻠﻮﻟﻬﺎ ﻣﺨﺼﻮﺻﺎً ﻣﺤﻠﻮل A ﺣﺘﻤﺎ ﺧﻮب ﺗﮑﺎن داده ﺷﻮد.
محدوده ﻧﺮﻣﺎل:
ﺑﺮ اﺳﺎس ﻣﻌﯿﺎر ﻫﺎى ﺳﺎزﻣﺎن ﺑﻬﺪاﺷﺖ ﺟﻬﺎﻧﯽ ﻣﺤﺪوده ﻧﺮﻣﺎل وﺟﻮد ﻟﮑﻮﺳﯿﺖ در ﻣﺎﯾﻊ ﻣﻨﻰ ﮐﻤﺘﺮ از ﯾﮏ ﻣﯿﻠﯿﻮن در ﻫﺮ ﻣﯿﻠﻰ ﻟﯿﺘﺮ ﻣﻰ ﺑﺎﺷﺪ ﮐﻪ ﺑﯿﺸﺘﺮ از ﯾﮏ ﻣﯿﻠﯿﻮن ﮔﻠﺒﻮل ﺳﻔﯿﺪ در ﻫﺮ ﻣﯿﻠﯽ ﻟﯿﺘﺮ ﻣﺎﯾﻊ ﻣﻨﯽ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻟﻮﮐﻮﺳﯿﺘﻮاﺳﭙﺮﻣﯽ ﺗﻌﺮﯾﻒ ﻣﯽ ﮔﺮدد.
ﺗﻮﺻﯿﻪ ﻫﺎی اﯾﻤﻨﯽ:
- ﭘﺲ از اﻧﺠﺎم آزﻣﺎﯾﺶ ﮐﯿﺖ ﺑﻪ ﯾﺨﭽﺎل ﺑﺎ دﻣﺎی C° 8-2 ﻣﻨﺘﻘﻞ ﺷﻮد.
- اﺳﺘﻔﺎده از دﺳﺘﮑﺶ و ﻣﺎﺳﮏ در زﻣﺎن اﻧﺠﺎم آزﻣﺎﯾﺶ ﺗﻮﺻﯿﻪ ﻣﯽ ﮔﺮدد.
- از آﻧﺠﺎ ﮐﻪ ﻣﺎﯾﻊ ﻣﻨﻰ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻧﻤﻮﻧﻪ ﺑﯿﻮﻟﻮژﯾﮏ ﺑﺎﻟﻘﻮه آﻟﻮده در ﻧﻈﺮ ﮔﺮﻓﺘﻪ ﻣﻰ ﺷﻮد ، ﮐﻠﯿﻪ ﻧﮑﺎت اﯾﻤﻨﻰ ﻣﻮرد ﻧﯿﺎز ﺑﺮاى ﮐﺎر ﺑﺎ ﻣﻮاد آﺳﯿﺐ رﺳﺎن ﺑﯿﻮﻟﻮژﯾﮏ رﻋﺎﯾﺖ ﮔﺮدد
References:
– Organization, W.H., WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. 2010: World Health Organization.
– Oborna I, Fingerova H, Novotny J, Brezinova J, Svobodova M, Aziz N.Reactive oxygen species in human semen in relation to leukocyte contamination. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub. 2009 Mar; 153(1):53-7.
– Johanisson E, Campana A, Luthi R, de Agostini A. Evaluation of ’round cells’ in semen analysis: a comparative study. Hum Reprod Update. 2000 Jul-Aug; 6(4):404-12.